質(zhì)粒是基因工程中最常用的運載體,擔(dān)負(fù)著將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中的重要使命。高速離心機(jī)對從細(xì)菌中分離質(zhì)粒有非常重要的作用。以下是一實驗室質(zhì)粒提取的步驟,使用蜀科TD-20高速離心機(jī)進(jìn)行操作:
1、將擴(kuò)增好的菌液重懸,轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中;
2、用質(zhì)粒小量抽提試劑盒,按說明書要求提取質(zhì)粒;
3、細(xì)菌高速離心1min,徹底去除上清;
4、加入250ulRB溶液,振蕩器充分懸浮細(xì)菌;
5、加入250ulLB溶液。立即上下顛倒10次,使細(xì)菌裂解,室溫,放置2min;
6、加入250ulNB溶液。立即上下顛倒10次,使之充分中和,室溫,放置2min;
7、室溫,15000rpm,蜀科高速離心機(jī)離心15min;
8、將吸附柱放入收集管內(nèi),離心得到的上清轉(zhuǎn)移至吸附柱,室溫,15000rpm,蜀科高速離心機(jī)離心30s;
9、棄廢液,將吸附柱放入收集管,加入700uL WB溶液到吸附柱中,15000rpm,蜀科高速離心機(jī)離心30s;
10、重復(fù)上一操作;
11、將吸附柱放入干凈的1.5mL離心管中,加30-50uL預(yù)熱的Elution Buffer,室溫,放置2min,高速離心1min;
12、樣品進(jìn)行電泳檢測:1%瓊脂糖凝膠電泳,上樣量為2uL,紫外燈下觀察,最明亮的帶為超螺旋形式,可以在一定程度上表明提取質(zhì)粒的純度。
質(zhì)粒提取是基因工程最基礎(chǔ)的一步,高速離心機(jī)的運用非常頻繁,蜀科高速離心機(jī)全系采用轉(zhuǎn)頭識別技術(shù),有效防止轉(zhuǎn)頭超速運轉(zhuǎn),保護(hù)機(jī)器和人員安全,技術(shù)性能位居行業(yè)前列,歡迎選購!
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